2. 1. 6. Preparación de los medios de cultivo.
La preparación de medios de cultivo incluye la manipulación de múltiples sustancias. Esta preparación puede simplificarse mediante el uso de:
• Packs listos para usar, disponibles para medios frecuentemente utilizados. Habitualmente constan de medio base, sin reguladores.
• Elaboración de soluciones stock mas concentradas, agrupando los compuestos en varias soluciones stock, por ejemplo:
Stock 1: Macros (x10)
Stock 2: Sales de Calcio (x 10)
Stock 3: Micronutrientes (x 100)
Stock 4: Solución de hierro
Stock 5: Vitaminas (x 100)
Stock 6: Reguladores (cada uno individualmente) (x 200)
Estas soluciones stock se conservan en nevera (stock 1, 2, 3 y 4) o congelador (stock 5 y 6), según los compuestos que contengan, durante meses. Algunas soluciones deben conservarse en oscuridad.
Equipo automático de preparación y dosificación de medio de cultivo.
Algunos aspectos relevantes al preparar el medio o las soluciones stock:
La cantidad de un compuesto a añadir, en peso, es función de su grado de hidratación. Lo relevante es mantener la molaridad del nutriente; a igual peso del compuesto, cuanto mayor grado de hidratación menor molaridad del nutriente.
La concentración de una solución stock está limitada por la solubilidad de sus compuestos y por las interrelaciones entre ellos. La disolución de los compuestos no debe dar lugar a reacciones entre ellos que causen algún tipo de precipitación o que disminuyan su capacidad de incorporación al explanto.
Algunos compuestos, por ejemplo muchos reguladores de crecimiento, son poco hidrosolubles. Para preparar sus soluciones stock se disuelven en una pequeña cantidad de soluciones ácidas o básicas (OHNa 1N, HCl 1N), solventes orgánicos (ej. DMSO), o etanol, teniendo siempre presente el potencial efecto (toxicidad, efecto sobre el pH, etc.) de dichos solventes.
Los compuestos termolábiles deben ser incorporados mediante filtración al medio ya autoclavado y a temperaturas cercas a la temperatura ambiente pare evitar su degradación.
| Compuestos | Degradación por el calor | Referencias |
| ABA | Ligera | Catálogo Sigma |
| Sulfato de adenina | Liau y Boll,1970 | |
| Ácido L-ascórbico | Catálogo Sigma | |
| L-asparagina | Liau y Boll, 1970 | |
| Pantotenato cálcico | Alta | Dodds y Roberts, 1982; Catálogo Sigma |
| Ácido trans-cinámico | Catálogo Sigma | |
| Cisteina | Butenko, 1964 | |
| Benziladeninaribósido | Catálogo Sigma | |
| Cloruro de colina | Liau y Boll, 1970 | |
| Ácido fólico | Liau y Boll, 1970 | |
| Fructosa | Substancias inhibidoras | Stehsel y Caplin, 1969 |
| Ácido geberélico | Ligera | Butenko, 1964; Watson y Haperin, 1981 |
| L- glutamina | Alta | Liau y Boll, 1970; Thompson et al. 1977 |
| IAA | Degradación de un 40% en 20 minutos de autoclavado | Nissen y Sutter, 1988; Catálogo Sigma |
| IAA-L-alanina | Ligera | Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma |
| IAA- L-ácido aspártico | Pronunciada | Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma |
| IAA-glicina | Ligera | Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma |
| IAA-L-fenilalanina | Ligera | Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma |
| IBA | Degradación de un 20% en 20 minutos de autoclavado | Nissen y Sutter, 1988; Catálogo Sigma |
| Kinetina | Ligera | Catálogo Sigma |
| Extracto de malta | Substancias inhibidoras | Solomon, 1950 |
| Nicotinamida | Liau y Boll, 1970 | |
| Ácido nicotínico | Liau y Boll, 1970 | |
| N,N'-dimetilurea | Total | Schmitz y Skoog, 1970 |
| Ácido pantoténico | Alta | Dodds y Roberts, 1982; Catálogo Sigma |
| PBA | Ligera | Catálogo Sigma |
| Phloridzina | Krikorian et al. 1982 | |
| Piridoxina | Ligera | Singh y Krikorian, 1981 |
| Riboflavina | Liau y Boll, 1970; Catálogo Sigma | |
| 2-iP | Ligera | Catálogo Sigma |
| 2-iP ribósido | Catálogo Sigma | |
| Tiamina | Alta a pH >5.5 | Linsmaier y Skoog, 1965; Liau y Boll, 1970 |
| L-triptófano | Butenko, 1964; Catálogo Sigma | |
| Urea | Liau y Boll, 1970; Peters y Mayne, 1974 | |
| Zeatina | Ligera | Catálogo Sigma |
2. 2. Esterilización
La esterilización es el proceso mediante el cual cualquier material, sitio o superficie se libera completamente de cualquier microrganismo vivo o espora. Se dice que tales materiales y sitios so estériles o se han esterilizado. En la terminología médica se utiliza generalmente la palabra asepsia para designar la condición en la que están ausentes los microrganismos patógenos; quienes trabajan en el cultivo de tejidos de plantas utilizan la palabra aséptico como sinónimo de estéril.
La desinfección se limita generalmente al proceso de destrucción de los microrganismos mediante métodos químicos; la esterilización se refiere a menudo al método físico para la destrucción de los microrganismos. Se utiliza la palabra axénico para las preparaciones que están libres de virus, viroides o microplasmas.
- Roca & Mroginski. (1982). Experimentes in Plant Tissue Culture. Cambridge University Press.
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